Welcome久赢开户网址為夢而年輕!

伱的位置:首頁 > 新聞動态 > 人外周血淋巴細胞分離液推動了實驗發展

人外周血淋巴細胞分離液推動了實驗發展

2016-04-08      點擊:636

    人外周血淋巴細胞分離液推動了實驗發展

    人外周血淋巴細胞分離液包括淋巴細胞和單核細胞等細胞,其體積、形态和密度與其他細胞不同,紅細胞和白細胞等細胞密度較大,為1.090 g/ml左右,而淋巴細胞和單核細胞密度為1.075~1.090 g/ml,血小闆為1.030~1.035 g/ml。為此,将葡聚糖(右旋糖酐)和泛影酸葡甲胺按一定比例混合,調整比重、pH值和滲透壓,經過澄清及除菌過濾後制成一種密度在1.077g/ml并且近于等滲的人外周血淋巴細胞分離液,經過密度梯度離心使一定密度的細胞按相應密度梯度分布,從而将各種血細胞加以分離。

    人外周血淋巴細胞分離液為帶有乳光或微乳光的滅菌水溶液。主要成分是Ficoll 400與泛影酸葡甲胺。人外周血淋巴細胞分離液适用于從血液分離所需細胞,在醫療和醫學生物學研究中廣泛應用。其他人及動物多種比重細胞分離液。注:因不同種屬不同比重分離液的細胞離散系數及細胞帶電不同,所以用戶在定制分離液時應提供所需分離液的比重、動物的種屬及被分離細胞的名稱。将采到的肝素抗凝血取樣計數白細胞總數。使用人外周血淋巴細胞分離液将血樣1:1稀釋,混勻時要沿管壁吹出,避免産生氣泡。吹勻後于37℃水浴中平衡。從冰箱中取出4℃避光保存的人外周血淋巴細胞分離液。搖勻後在無菌狀态下加入刻度離心管中。操作中盡量避免吸管碰觸管壁。原則上分離液的高度不超過管高的1/4。

    将盛有分離液的離心管放入37℃水浴中平衡,用吸管将稀釋的血液沿離心管壁徐徐加到分離液面上,用力要輕,避免血液沖入分離液中,使得稀釋血重疊在分離液面以上,擰緊管蓋。稀釋血與分離液的高度比在1:2-2:1之間。原則上兩者的總高度不超過離心管的2/3。将離心管放置于水平離心機中,室溫下 2000rpm離心20min。離心過程中要觀察離心速度是否正确,且在停止時選擇“no break”,避免因為急劇減速将已經分離的單個核細胞層重新弄混。注意離心結束時的減速過程,不要太快。人外周血淋巴細胞分離液離心結束後可見管内分為四層,從上至下分别為:血漿層(含部分血小闆)、白膜層(含單個核細胞及少量血小闆)、分離液層、粒細胞及紅細胞層。将吸管輕輕穿過血漿層至白膜層,沿離心管周緣吸出血漿層與分離液層界面間的白膜層細胞,置于新離心管中。盡量少吸取分離液。

    人外周血淋巴細胞分離液注意吹打均勻,不要有細胞團塊。室溫下1500rpm離心5min,洗滌兩次。zui後一次洗滌時定量加入RPMI1640,吹打均勻後取樣計數細胞,zui後一次離心完畢傾倒出上清液後請請要度離心管,将管底細胞搖勻。根據上一步的計數結果,用含FBS10%-20%、雙抗的RPMI1640培養液将細胞配成所需濃度。人外周血淋巴細胞分離液的離心管以小管徑為佳,細胞層相對厚,便于淋巴細胞的吸取,2000rpm的相對離心力大概在573g-708g,不同的離心機可以注意計算一下離心力與轉數的關系。人外周血淋巴細胞分離液離心速度太慢或時間不足時,淋巴細胞層較薄,且在這個層面上有紅細胞混雜;離心速度太快或時間過長時,淋巴細胞層相對分散,會進入下面的分離液層,每次将離心管帶入超淨台内時要用酒精擦拭離心管,尤其管口和管帽。