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肌球蛋白樹立結構緊湊的創新性設計新标準

2016-04-26      點擊:516
    肌球蛋白樹立結構緊湊的創新性設計新标準
    肌球蛋白輕鍊擁有自己的肽鍊,這點與重鍊不同。它們不被包括在肌球蛋白家族中,但對形成肌球蛋白酶催化超分子複合體有重要作用。
    肌球蛋白是以免疫學反應為基礎,将抗原、抗體的特異性反應與酶對底物的催化作用相結合起來的一種敏感性很高的實驗技術,由于抗原、抗體的反應在一種固相載體-聚苯乙烯微量滴定闆的孔中進行,每加入一種試劑孵育後,可通過洗滌除去多餘的遊離反應物,從而保證試驗結果的特異性與穩定性。肌球蛋白實際應用中,通過不同的設計,具體的方法步驟可有多種。即:用于檢測抗體的間接法、用于檢測抗原的雙抗體夾心法以及用于檢測小分子抗原或半抗原的抗原競争法等等。目前我們對客戶提供比較常用的ELISA雙抗體夾心法及ELISA間接法服務。肌球蛋白存在于橫紋肌肌原纖維的粗絲中,也存在于平滑肌中,在肌肉運動中起重要作用,心肌細胞損傷越嚴重,血清CMLC水平越高。
    肌球蛋白用緩沖液将抗體稀釋至1-10ug/ml。在反應孔中加0.1ml,4℃ 過夜。次日,棄去孔内溶液,用洗滌緩沖液洗3次,加一定稀釋的待檢樣品0.05ml于上述已包被之反應孔中,置37℃ 孵育1小時。然後洗滌,同時做空白孔,陰性對照孔及陽性對照孔。肌球蛋白加酶标抗體于各反應孔中,加入新鮮稀釋的酶标抗體(經滴定後的稀釋度)0.05ml。37℃ 孵育0.5~1小時,洗滌。肌球蛋白加底物液顯色于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分鐘。肌球蛋白終止反應于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml。肌球蛋白因其免疫學的特異性強,所以CMLC的測定是迄今為止診斷AMI和研究心肌損傷及保護較特異的生化指标。
    肌球蛋白結果判定可于白色背景上,直接用肉眼觀察結果:反應孔内顔色越深,陽性程度越強,陰性反應為無色或極淺,依據所呈顔色的深淺,以“+”、“-”号表示。也可測OD值:在ELISA檢測儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對照孔調零後測各孔OD值,若大于規定的陰性對照OD值的2.1倍,即為陽性。肌球蛋白是肌肉結構蛋白的一種,分子量480000,由兩條重鍊(分子量200 000)及四條輕鍊(兩條L2,分子量18 000,L1、L3分子量分别為16 000、25 000)組成,分子構型如豆芽狀。兩條重鍊的大部分互相繞成雙螺旋狀,構成豆芽的莖部;總鍊的其餘部分與輕鍊一起構成豆芽的豆瓣部分。