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人外周血淋巴細胞分離液引發關注和熱議

2016-07-06      點擊:573
 人外周血淋巴細胞分離液引發關注和熱議
    人外周血淋巴細胞分離液分離方法說明及圖例
    A.取1ml新鮮抗凝血,與全血及組織稀釋液1:1 混勻後小心加于1份本分離液之液面上;
    B.  以500g(約1800轉/分)離心25分鐘(半徑15cm水平轉子)。
    此時離心管中由上至下細胞分四層。*層;為血漿層。第二層;為環狀乳白色的白細胞層。第三層;為略帶混濁的分離液層(富集一定量的白細胞)。第四層;為紅細胞層。棄去*層血漿層,收集第二層細胞、第三層分離液層和第四層紅細胞層,放入含細胞洗滌液10ml的試管中,充分混勻後,以500g約(1800轉/分)離心30分鐘。沉澱經1次洗滌後用紅細胞裂解液裂解紅細胞,再經3次洗滌去除紅細胞内溶物和碎片後取沉澱細胞即為所需白細胞
    注:  提取率約為80%。
    人外周血淋巴細胞分離液注意事項
    A.  本人外周血淋巴細胞分離液是敏光型的,在運輸和貯藏過程中應在18℃-25℃避光保存,啟封後置4℃保存避免微生物污染。另外,人外周血淋巴細胞分離液為真空包裝,未啟封前置于10℃  以下易出現白色結晶,影響分離效果。
    B.  待分離的樣本要求新鮮,避免冷凍和冷藏。人外周血淋巴細胞分離液和所分離樣本一定在20℃水浴箱中複溫20  分鐘保證人外周血淋巴細胞分離液和所分離樣本溫度在20℃±2℃時分離效果zui好,且所有操作過程一定要在無菌條件下進行。
    C. 由于各品牌離心機的性能不同,國内南北地區溫度環境和四季的差異,人外周血淋巴細胞分離液可能影響分離效果,用戶可以調節離心轉數,調節離心的時間,摸索zui佳的分離條件(具體分離條件各實驗室自定)。
    D.  zui好使用無靜電反應的離心管,推薦使用未經過堿處理的玻璃離心管。
    E.  zui優抗凝劑選擇:EDTA、枸橼酸、肝素。人外周血淋巴細胞分離液應注意在血液稀釋過程中應去除抗凝劑體積。
    人外周血淋巴細胞分離液産品性能指标
    pH  7.0-7.5
    滲透壓           280-340mOsmol/kg
    内毒素                          ≤0.5EU/ml
    無菌 直接接種培養14  天後培養基澄清
    澄明度及不溶性顆粒物           每50ml  溶液中含10μm  以上的不溶性微粒20  粒以下,
    含25μm  以上的不溶性微粒5  粒以下
    人外周血淋巴細胞分離液貯藏及保存期限
    18℃-25℃避光保存,有效期兩年。啟封後置4℃保存,人外周血淋巴細胞分離液有效期一周。
    注:若保證無微生物污染,啟封後可置4℃長期保存。人外周血淋巴細胞分離液但應注意保存溫度較低時本分離液易 出現白色結晶,影響分離效果。